分子生物学实验

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诺百优势
  • 我们可利用多套技术方案提供量身定做的个性化服务,包括DNA测序法和MGB探针法。
    1. DNA测序法:该方法原理简单,容易掌握,适合对短基因片断的SNP筛查;通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%;
    2. MGB探针法:先进的荧光检测技术,实现多色荧光同时检测。通量大,速度快;操作简便:一步PCR反应后,直接上机检测。适合位点数量少,样本通量高的检测(探针合成费用高)。
    3. Multiplex SNaPshot SNP分型法:该技术主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶,四种荧光标记的ddNTP,紧挨多态位点5'端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪跑胶后,根据峰的颜色可知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型,根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。该技术跟其它SNP分型技术相比的优势:分型准确,其准确度仅亚于直接测序;多位点同时检测(可以同时检测达12个位点);不受SNP位点多态特性限制,不管该位点是G/C,A/T,G/A,C/T还是插入/缺失多态,都可以放在一个体系中检测;可以检测出受污染的样本。
  • 质量保证:SNP检测的检出率接近100%。
原理
SNP(single nucleotide polymorphism),即单核苷酸多态,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。一般来说,一个SNP位点只有两种等位基因,因此又叫双等位基因。SNP在人基因组中的发生频率比较高,大约平均每1000个碱基中就有一个多态位点,是继微卫星之后的第三代遗传标记。有些SNP位点还会影响基因的功能,从而导致生物性状改变甚至致病。SNP广泛用于群体遗传学研究(如生物的起源、进化及迁移等方面,将逐渐取代微卫星而成为新一代的分子生物学标记)和疾病相关基因的研究,在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。

服务流程

  1. 测序法
  2. 客户提供:提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的基因组DNA;提供已知的全长基因序列;提供尽可能详细的背景资料。
  3. 引物设计与合成:针对客户感兴趣的DNA区域,我们将为客户提供包括PCR扩增引物和测序引物在内的所有引物。
  4. PCR服务:包括PCR扩增实验和PCR产物纯化。
  5. 测序服务:我们采用ABI 3730xl 测序仪进行重测序反应。
  6. 数据分析服务:对整个重测序实验的结果进行初步分析。
  7. 我们提供:峰图文件(abl.格式),序列文件(seq.格式);数据分析报告。
  8. MGB探针法
  9. 客户提供:提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的基因组DNA;提供已知的全长基因序列;提供尽可能详细的背景资料。
  10. 根据基因序列设计特异性的引物和MGB探针。
  11. 提取DNA/RNA。
  12. 以DNA为模板,对目的基因进行荧光定量PCR检测分析。
  13. 提供实验分析结果。
  14. 我们提供:峰图文件(abl.格式),序列文件(seq.格式);数据分析报告。
  15. Multiplex SNaPshot SNP分型法
  16. 客户提供:提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的基因组DNA;提供已知的全长基因序列;提供尽可能详细的背景资料。
  17. 设计PCR 扩增含SNPs 位点的一段DNA。
  18. 对PCR 产物进行纯化(去除引物和dNTP)。
  19. 引物延伸。
  20. 延伸产物检测。
  21. 我们提供:峰图文件(abl.格式),序列文件(seq.格式);数据分析报告。

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