原理及实验流程示意图:
2.多重SNaPshot SNP分型方法
技术原理:SNaPshot SNP分型是一种以单碱基延伸原理为基础,同时利用多重PCR对多个已知SNP 位点进行遗传分型的方法。在一个含有测序酶,四种荧光标记的ddNTP,紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI 3730 测序仪跑胶后,根据峰的颜色可知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型,根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。
原理及实验流程示意图:
3.MassArray SNP分型方法
技术原理: Sequenom MassArray系统主要是利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 进行分析,即PCR扩增产物或者预处理样本在延伸单碱基后,将制备的样品分析物与芯片基质共结晶,将该晶体放入质谱仪的真空管,而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发,由于基质分子经辐射吸收能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子,产生的离子多为单电荷离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能,进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率得以分离,在真空小管中飞行到达检测器。
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4.直接测序法
技术原理:将待检测片段进行PCR扩增并直接测序是SNP检测方法中最准确的方法。纯合位点为单峰,而杂合峰为套峰,因而很容易将几种基因型区分开来。直接测序法不仅可用于对已知位点的检测,还可用于发现未知的SNP位点。
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