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诺百优势
  • 质量保证:确保制备的病毒颗粒携带片段的正确性,病毒颗粒的总数和病毒颗粒的滴度达到要求
  • 去除了病毒的关键蛋白,对人体安全;属于复制缺陷型病毒,不会产生下一代病毒颗粒;已被改造为自身失活性,病毒转导并整合到细胞后不再具有产生具有包装能力的病毒基因组。
  • 稳定整合到细胞基因组,可用于制备多种稳定沉默特定基因的细胞株
原理
慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构,但也有不同于逆转录病毒的组份和特性,作为基因治疗载体发展起来,最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,lentivirus-shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。
服务流程
  • 客户提供:表达miRNA/shRNA的质粒(提供测序图谱)或所要Knockdown的靶基因的名称、序列;所需要的病毒滴度及总量,病毒是否需要纯化;若需要检测靶基因的表达变化,如需要请提供相应的抗体
  • 含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取;
  • 慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞;
  • 培养48~72h,收集培养上清;
  • 病毒的纯化和浓缩;
  • 滴度测定、目的基因检定
  • 将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。
  • 我们提供:提供重组后的慢病毒载体质粒,并附上对目的基因的PCR鉴定结果;提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液
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