分子生物学实验

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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗体的特异性结合以及Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法,常应用于研究细胞内蛋白质与蛋白质相互作用。

免疫共沉淀(Co-IP)大致实验流程为:构建目标基因的质粒,共转细胞,在细胞裂解液中加入抗诱饵蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G,若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“目标蛋白+诱饵蛋白+抗诱饵蛋白抗体+Protein A或G”,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。

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