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原代细胞永生化
正常组织来源的细胞在通常的体外培养条件下可生长和分裂,但经过有限次的细胞传代后,就会停止增殖,发生衰老和死亡。这就限制了细胞培养技术的进一步应用。细胞永生化(cell immortalization)指体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离,从而具有无限增殖能力的过程。
通过基因转染等技术将外源性永生化基因,如病毒、原癌基因和抑癌基因突变体等,导入目的细胞内,以增加永生化的发生率,进而建立永生化细胞株(immortalized cell strains),以达到使体外培养的细胞具有无限增殖能力且细胞间无差异的目的。
成功案例

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)

人子宫内膜间质细胞

小鼠肾成纤维细胞

小鼠肝星状细胞

小鼠支气管上皮细胞

小鼠心肌细胞

大鼠肝星状细胞

大鼠心肌成纤维细胞

大鼠心肌细胞

大鼠胰腺星状细胞

大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)

大鼠星状胶质细胞

可选方法
SV40 Large T,hTERT,cdk4,myc

可选方法

参考文献

1.KATAKURA Y, ALAM S, SHIRAHATA S. Immortalization by gene transfection[J]. Methods in Cell Biology, 1998, 57: 69-91

2.FURUKAWA T, DUGUID W P, ROSENBERG L, et al. Long-term culture and immortalization of epithelial cells from normal adult human pancreatic duct transfected by the E6 E7 gene of human papillomavirus 16[J]. American Journal of Pathology, 1996, 148(6): 1763-1770

3.DICKSON M A, HAHN W C, INO Y, et al. Human keratinocytes that express hTERT and also bypass a p16(INK4a) enforced mechanism that limits life span become immortal yetretain normal growth and differentiation characteristics [J]. Methods in Cell Biology, 2000, 20(4): 1436-1447.

4.BODNAR A G, OUELLETTE M, FROLKIS M, et al. Extension of lifespan by introduction of telomerase into normal human cells[J]. Science, 1998, 279(5349): 349-352.

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