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RNA甲基化m6A研究工具
随着表观遗传学研究的不断深入，组蛋白修饰和DNA甲基化修饰相关的高水平研究成果如雨后春笋般涌现，遍布Nature、Cell和Science等期刊杂志。在分子生物学的中心法则中，遗传信息从DNA、RNA流向蛋白。基因组DNA和组蛋白上都存在可逆的表观遗传学修饰，这些修饰可调控基因的表达，并由此决定细胞的状态，影响细胞的分化和发育。近两年，科学家们首次发现了一种可逆性的RNA甲基化—m6A。随后，研究人员陆续定位了哺乳动物转录组中的m6A，鉴定了这种动态修饰的“读”、“写”和“擦除”蛋白，解析了m6A在转录后调控中的一些功能。由此，RNA甲基化（m6A）研究在表观遗传领域开始崭露头角，成为最前沿的热点！


图1：DNA, RNA, Protein的表观遗传修饰

N6-甲基腺嘌呤(m6A）是真核生物最常见和最丰富的RNA分子修饰。m6A修饰是METTL3等甲基转移酶复合体催化的，而最近新发现的RNA去甲基化酶FTO和ALKBH5可以通过一种α-酮戊二酸和Fe2+依赖型的形式对m6A去甲基化。METTL3、FTO和ALKBH5被证明在很多生物过程中起重要作用，从发育和代谢到生殖。m6A存在于很多物种质中，占到了RNA碱基甲基化修饰的80%。m6A主要分布在mRNA中，也出现在非编码RNA如tRNA、rRNA和snRNA。在转录成的RNA中相对高的m6A含量会影响RNA的代谢过程，比如剪切，核转运，翻译能力和稳定性，以及RNA转录。


图2：RNA甲基化修饰示意图


我们建立了子宫内膜基质细胞蜕膜化的模型：在雌、孕激素处理的基础上再加入cAMP三者联合诱导产生蜕膜化。采用三者联合诱导的原因是雌激素可使子宫内膜增生，cAMP可通过调节转录因子的活性来增加子宫内膜基质细胞对孕酮的敏感性；同时通过检测蜕膜化的标志分子如PRL、IGFBP-1、ACP(酸性磷酸酶)、hsp27和层粘连蛋白等来判断诱导蜕膜是否成功。子宫内膜基质细胞产生蜕膜化后，经HE染色显示，细胞核呈现多核化，胞体大而圆，为蜕膜化成功一个标志，如下图所示。


主要产品和服务

1）预制病毒


基因名

种属

类型

转录本

内部编号

ALKBH5

人

过表达慢病毒

NM_017758

CL203

ALKBH5

大鼠

干扰慢病毒

NM_001191643

CL1931

METTL3

人

过表达慢病毒

NM_019852

CL1638

METTL3

人

干扰慢病毒

NM_019852

CL1240

METTL3

小鼠

过表达慢病毒

NM_019721

CL1032-1

METTL14

人

过表达慢病毒

NM_020961

CL1961

METTL14

人

干扰慢病毒

NM_020961

CL1963

METTL14

小鼠

过表达慢病毒

NM_201638

CL1032-2

FTO

小鼠

过表达慢病毒

NM_011936

CL1032-3

2）检测整体的m6A甲基化水平：采用类似于ELISA竞争免疫的方法，样本与m6A抗体孵育；然后转移到包被有m6A多核苷酸的孔上。样本RNA上的m6A可竞争性抑制m6A抗体与涂抹在孔上m6A的结合。因此，微孔板读取仪测的信号与样本中m6A的整体含量成反比。并且样本中m6A的量可以通过预先设定的m6A标准品来实现定量检测。

3）检测特定基因的m6A甲基化水平（MeRIP-qPCR）：将RNA免疫共沉淀（RIP）与荧光定量PCR相结合的技术，通过特异性抗体富集total RNA中发生m6A甲基化修饰的RNA，借助特异性引物实现对m6A修饰的RNA进行定量的目的，可以应用于经MeRIP-seq发现的m6A修饰的基因（或已知的某个靶基因）在组间样本中m6A修饰水平的差异。


4）m6A RNA甲基化测序（MeRIP-Seq）：可进行m6A RNA甲基化谱研究，快速筛选m6A RNA甲基化靶基因；将甲基化RNA免疫共沉淀和RNA测序技术组合起来，可一次性检测样品中所有RNA分子上的m6A甲基化修饰状况，并计算出不同样本中RNA差异m6A甲基化程度。

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